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饲料中维生素B6测定方法
来源: | 作者:饲料中维生素B6测定方法 | 发布时间: 2021-09-26 | 3684 次浏览 | 分享到:

饲料中维生素B6测定方法 

1、主题内容与适用范围 
  本标准适用于配合饲料,预混合饲料,浓缩饲料中所添加维生素B6的测定。测定范围为0.08~3.5μg/mL。 

2、原理 
 用水提取,在pH7条件下,用荧光法测定维生素B6。 

3 试剂和溶液 
  除特殊规定外,本标准所用试剂均为分析纯,水为蒸馏水或相应纯度的水。 
3.1 pH7缓冲液   
称取29.3023g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O,GB1263)和3.8115g柠檬酸(C6H8O7·H2O),HGB 3296)于100mL容量瓶中,用煮沸后冷却的水,溶解并定容至刻度。混匀备用。 
3.2 维生素B6标准贮备溶液 
  称取40mg(中国药典参照标准)维生素B6,或复合维生素(中国药典参照标准)B640mg,B1100mg,B250mg(精确至0.0001g)于100mL容量瓶中,加水溶解定容至刻度,此液1mL含400μg的维生素B6。 
3.3 维生素B6标准工作溶液 
  吸取(3.2)贮备液1mL于100mL容量瓶中加水稀释至刻度,混匀,此液1mL含4μg的维生素B6。 

4、 仪器设备 
4.1 荧光分光光度计; 
4.2 分析天平:感量0.0001g。 
4.3 实验室用器皿 
  容量瓶1000mL,100mL,50mL,25mL。 
刻度移液管10mL,5mL,1mL。 

5、分析步骤 
5.1 试样的选取和制备 
 选取有代表性的试样,粉碎通过0.28mm孔筛,用四分法缩减至100g,密封保存,以防试样维生素B6变化或变质。 
5.2 测定步骤 
5.2.1 维生素B6的提取 
  称取试样(配合饲料,浓缩饲料,预混合饲料)0.5~2g,(精确至0.0001g)于100mL容量瓶中,加水溶解后,定容至刻度,振荡1~2min,静置待沉清,或离心(400r/min)10min。 
5.2.2 试样的测定 
  移取试样的上清液1mL(≤40μgVB6)于25mL容量瓶中,加入(3.1)pH7缓冲液至刻度,混匀,用1cm石英比色杯,置入荧光分光光度计内,于激发波长326nm、发射波长395nm测定其荧光强度。 
  同时做空白试验。 
5.2.3 工作曲线的绘制 
  取0.00,0.50,1.00,1.50,2.00,2.50mL维生素B6标准工作液(3.3)分别于25mL容量瓶中,加入pH7缓冲液(3.1)至刻度,混匀,用1cm石英比色杯,置入荧光分光光度计内,于激发波长326nm、发射波长395nm测定其荧光强度,以荧光强度为纵坐标,维生素B6量为横坐标,绘制工作曲线。 

6、分析结果计算和表述   
维生素B6的含量(mg/kg)按下式计算: 
VB6(mg/kg)=M×D/W×(1000/1000)=M×D/W 
式中:M──工作曲线上查得维生素B6含量,μg/mL; 
W──试样的质量,g; 
D──试样的总体积,mL。 

7、允许差 
7.1 每个试样称取两份平行测定,取算术平均值为测定结果并保留两位小数。 
7.2 维生素B6含量少于40mg/kg以下,平行测定结果相对差值不大于10%,维生素B6含量大于40mg/kg的平行测定结果相对差值不大于5%


 

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